Герпес на губах, методы диагностики герпеса, герпетическая инфекция

    Содержание:
  1. Материалом для исследования при герпетической инфекции полости рта являются:
  2. Выделяют три основных диагностических подхода:
  3. Микроскопические методы исследования герпеса:
  4. К методам экспресс-диагностики герпеса относится:
  5. Определения вирусных антигенов возможно при помощи реакции иммунофлюорисценции.
  6. Серологические методы диагностики герпеса:

Проблеме диагностики герпесвирусных инфекций посвящено множество научных публикаций, однако в последнее время все более возрастает интерес к этому вопросу со стороны клиницистов разных специальностей. По данным литературы, вирусом простого герпеса инфицировано 65-90 % взрослого и детского населения планеты. Местом локализации первичной герпесвирусной инфекции чаще всего является слизистая оболочка полости рта.

Несмотря на широкое и разностороннее изучение данной патологии, отмечается тенденция к росту распространенности герпетических стоматитов, особенно среди детского населения. Наделю герпетической инфекции среди всех поражений слизистой полости рта у детей приходится около 80 %, у 8-20% пациентов заболевание принимает рецидивирующий характер. При этом вирус может поражать практически все органы и ткани человеческого организма. У детей грудного и раннего возраста, после исчезновения антител, полученных интерплацентарно от матери, герпетическая инфекция, как правило,протекает в виде острого герпетического стоматита. Хроническая герпетическая инфекция в полости рта проявляется в виде рецидивирующего герпетического стоматитаили герпеса губ.

Современные наблюдения специалистов позволяют говорить о изменении клинической картины герпетического стоматита и выделении атипичных форм заболевания, а именно геморрагической, геморагически-некротической, язвенной, отечной, элефанзиазоподобной, рупеоидной, зудящей, эритематозной и папулезной, герпетиформной экземы Капоши, генерализованного герпеса. В литературе упоминается импетигоподобная форма герпеса, при которой высыпания на слизистой оболочке полости рта сочетаются со стрептококковым импетиго в периоральной зоне. Атипичные формы заболевания затрудняют диагностику. Таким образом, высокая инфицированность населения и распространенность заболевания, наличие атипичных форм и отсутствие четких диагностических алгоритмов свидетельствуют об актуальности этой проблемы.

Материалом для исследования при герпетической инфекции полости рта являются:

Соскоб и мазок-отпечаток с элементов поражения, слюна, кровь.

На сегодняшний день существует большое количество лабораторных методов диагностики герпесвирусных инфекций.

Выделяют три основных диагностических подхода:

1). изоляция и идентификация вирусаиз клинического материала;

2). непосредственное исследование материала на наличие вируса, вирусного антигена или нуклеиновых кислот

3). серологическая диагностика, основанная на установлении значительного прироста вирусных антител в течение болезни.

«Золотым стандартом» диагностики вирусных заболеваний является вирусологический метод. Сущность метода состоит в выделении вируса в культурах клеток и куриных эмбрионах. Достоинствами метода являются его высокая чувствительность (85-100%) и специфичность (100%). Однако метод является дорогостоящим, трудоемким, его проведение требует специального оборудования и условий, высокой квалификации персонала. Результаты вирусологического исследования получают через 2-20 дней, что препятствует внедрению метода в повседневную клиническую практику. Чувствительность метода зависит от времени, прошедшего с момента забора материала до посева, качества забора материала, условий транспортировки, качества используемых сред и реагентов. Вирусологическое исследование является практически бесполезным спустя 5 суток после появления элементов высыпания. Современные авторы указывают на необходимость подтверждения результатов вирусологического исследования другими методами, в частности серологическими и молекулярно-генетическими. Однако метод позволяет не только получить чистую культуру вируса, но и оценить его чувствительность к противовирусным препаратам.

В настоящее время применяется ускоренный вирусологический метод выявления вирусов. При этом методе материал, полученный от больных, культивируется совместно с культурой клеток Vero в течение 24-х часов. После предварительной обработки применяется реакция непрямой иммунофлюорисценциии результаты оценивают под люминисцентным микроскопом.Этот метод позволяет выбрать антивирусный препарат для лечения герпетической инфекции и оценить эффективность противовирусной терапии через 1,5-2 месяца после окончания лечения. Результаты обследования готовы через 2-е суток.

Биологическая проба состоит в заражении чувствительных лабораторных животных (белых мышей или кроликов) биоматериалом, полученным от больного. Метод рекомендуют использовать в спорных случаях герпесвирусной инфекции и для диагностики атипичных форм.

Вирусологические исследования нашли применение в стоматологической практике. Так, выделение вируса в культуре клеток и на мышахприменялось для оценки эффективности препарата «Виферон» при лечении острого герпетического стоматита у детей. Биологическая проба так же применялась для изучения течения герпетической инфекции под влиянием разных методов лечения в экспериментальном исследовании на морских свинках.

Микроскопические методы исследования герпеса:

включают цитологическую диагностику и электронную микроскопию. Исследуемый материал для микроскопических методов получают путем соскоба или мазка-отпечатка с пораженных участков слизистой и кожи.

Цитологический метод позволяет оценить морфологические, тинкториальные особенности клеток и их компонентов, определить стадию развития элементов поражения при герпетической инфекции. При исследовании препаратов-отпечатков с элементов поражения у пациентов с герпетическим стоматитом выделяют следующие морфологические стадии развития: дегенерации или типичных клеточных повреждений, дегенерации и неспецифического воспаления, регенерации, эпителизации. На стадии дегенерации или типичных поражений клетки под микроскопом нередко можно увидеть эпителиоциты с характерными признаками, которые определяют как клетки Тцанка. Цитологические изменения заключаются в формировании гигантских многоядерных клеток округлой или неправильной формы с цитоплазмой голубого или фиолетового цвета. Количество ядер в таких клетках – 2 и более. Гигантские многоядерные клетки являются патогномоничными для вирусных заболеваний кожи и слизистых оболочек. Их выявляют при простом герпесе, а так же кори, ветряной оспе, опоясывающем лишае и других вирусных поражениях.В некоторых случаях в гигантских многоядерных клетках определяются внутриядерные включения, которые многие авторы называют тельцами Каудри. E. V. Cowdry предложил разделить внутриядерные включения на два типа: А — характеризующиеся общей реакцией всего ядра при наличии одного крупного включения и В — при ограниченной реакции ядра, когда включения представляются в виде маленьких «капелек» в ядерной массе. Однако, по мнению автора, во многих случаях включения типа В лишь соответствуют определенной стадии образования включений типа А. Единого мнения в отношении природы этих образований не существует. Одни исследователи считают, что отмеченные включения являются случайными артефактами при применении кислых фиксаторов, другие считают внутриядерные включения Каудри типа А специфическим материалом, связанным с репродукцией вируса герпеса. По мнению этих исследователей, включения состоят из тонкого гранулярного материала с пучками фибриллярных структур, вирусных частиц, мембранных осколков. Гигантские многоядерные клетки выявляют при остройи хронической рецидивирующей инфекции. В то время как внутриядерные включения, по мнению некоторых авторов, определяются только при повторных поражениях.

Цитологический метод простой, доступный, рассматривается как экспресс-метод, так как результаты исследования получают через 2-3 часа. Его чувствительность и специфичность не превышают 70-75 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практикедля проведения дифференциальной диагностики в сложных случаях и оценки эффективности лечебных мероприятий.

К методам экспресс-диагностики герпеса относится:

Электронная микроскопия. Метод позволяет выявить вирусные частицы в исследуемом образце. Для успешного определения вируса его концентрация в пробе должна быть примерно 1ˑ10 6 частиц в 1 мл. Но поскольку концентрация возбудителя в материале обычно незначительна, то требуется предварительное центрифугирование. Однако метод электронной микроскопии не позволяет дифференцировать вирусы простого герпеса и ветряной оспы, цитомегалии, поскольку они морфологически практически одинаковы. Использование метода ограничивается его трудоемкостью, малодоступностью, дороговизной, поэтому он применяется в основном в научных целях. Для получения результатов метода электронной микроскопии необходимо около 3-х часов, чувствительность метода составляет 70 %, специфичность около 100 %.

В настоящее время главенствующую роль в верификации герпесвирусных инфекций играют методы ДНК-диагностики, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ДНК-гибридизация.

Гибридизация ДНК – высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его специфического связывания (гибридизации) с меченой комплементарной молекулой ДНК-диагностикума. В качестве маркера применяют ферменты (пероксидазу, щелочную фосфатазу) и изотопы. Недостатком метода является его длительное время выполнения- в среднем 5-7 суток, а также высокая частота ложноотрицательных результатов при низком количестве вирусной ДНК в исследуемой пробе.

Наиболее широко используемым методом диагностики герпетической инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР), предложенная Мюллисом в 1983 году. В основе метода лежит катализируемая ферментом ДНК-полимеразой многократное образование копий (ампликация) определенного участка ДНК, представляющего диагностический интерес. Для ампликации отбирают уникальный ген, который наиболее четко отличает определяемый патоген от прочих.

Различают качественный, полуколичественный и количественный варианты метода. При проведении качественной ПЦР определяют лишь факт присутствия вируса, однако не возможным является оценка его репродуктивной активности, что не позволяет провести дифференциальную диагностику между латентными, персистирующими и реактивными формами инфекции. Полуколичественная ПЦР дает информацию о содержании копий вирусных ДНК в виде условных обозначений (+, ++, +++, ++++). Методом, позволяющим получить числовые значения, отражающие репродуктивную активность вируса является количественная ПЦР. Полученный количественный результат не соответствует истинному содержанию ДНК возбудителя в исследуемой пробе. При этом существует определенная пропорциональность между исходным количеством ДНК вируса и конечным результатом исследования. Такая пропорциональность соблюдается лишь при проведениидиагностики в стандартных условиях с использованием одних и тех же реактивов, поэтому сравнительный анализ полученных результатов в динамике проводят при обследовании пациента в одной лаборатории.

Ложноотрицательные результаты возможны при несоблюдении технологий и использовании некачественных реактивов. Ложноположительные данные возможны при подсчете результатов методом электрофореза, что обусловлено контаминацией воздушной среды рабочего пространства ампликонами при предварительных постановках, поэтому используют открытые методики подсчета результатов с надлежащей вентиляцией помещений и закрытые, которые являются более предпочтительными, так как предполагают отсутствие прямогоконтактамежду продуктами реакции и воздушной средой.

Наиболее точной является методика ПЦР в реальном времени (real time ПЦР). Ее особенностью является подсчет количества амплифицированных ДНК по мере их накопления после каждого цикла, а не в конце постановки ПЦР.

Даже количественная ПЦР не всегда позволяет отдифференцировать латентную и реактивированную инфекции. В этом случае рекомендуют использовать ПЦР обратной транскрипции, с помощью которой подсчитывают количество вирусной м-РНК, которое свидетельствует об интенсивности экспрессии вирусных генов. ПЦР является точным методом, так как для получения результата достаточно иметь в пробе всего одну молекулу ДНК возбудителя. Чувствительность ПЦР составляет 98%, а специфичность – 94 %. РезультатыПЦР можно получить уже через 3-6 часов после начала проведения.В стоматологической практике ПЦР широко применяется в диагностических целях. Установлена зависимость уровня вирусной активности в ротовой жидкости от степени тяжести герпетической инфекции.

Определения вирусных антигенов возможно при помощи реакции иммунофлюорисценции.

Этот метод основан на использовании иммуноглобулинов, меченных красителями и дающих зеленовато-желтую или красную флюорисценцию. Результаты метода учитывают при люминисцентой микроскопии препаратов обработанных меченными антителами. Метод иммунофлюорисценции используют в двух вариантах: прямой (ПИФ) и непрямой (НИФ). При прямом методе красителями метят антитела, непосредственно взаимодействующие с антигеном. При непрямом методе с исследуемым антигеном взаимодействуют специфические антитела, а уже с ними антивидовые антитела, меченые флюорохромом. Эти методы в какой то мере дублируют результаты ПЦР и могут быть полезны для исключения ложноположительных или ложноотрицательных результатов ДНК-диагностики. Чувствительность метода – 55-75 %, специфичность – 90 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практике для уточнения диагноза.

Серологические методы диагностики герпеса:

(реакции нейтрализации, связывания комплемента, гемагглютинации, иммунофлюорисценции и др.) позволяют оценить характер и напряженность специфического гуморального иммунитета. Все эти методы позволяют с разной степенью достоверности установить факт инфицирования пациента с вирусом. Диагностика основывается на наличии противогерпетическихIg M и Ig G. Наличие специфического Ig M свидетельствует об остроте процесса (первичная инфекция, реинфекция, реактивация). При первичной герпесвирусной инфекции противогерпетический Ig M появляется на 7-14 сутки после инфицирования и циркулирует 1-3 месяца. У отдельных лиц может сохраняться на протяжении длительного времени, давая ложную информацию об остроте процесса. Противогрепетические Ig G являются антителами вторичного иммунного ответа. При первичной инфекции выявляются во второй половине инфекционного процесса, а также при латентной, персистирующей инфекции и реактивации вируса. Рекомендуют применять метод парных сывороток, оценивая титр специфических антител с промежутком в 2-3 недели. Однако четырехкратное повышение титра специфическогоIg G является диагностическим критерием лишь при первичном инфицировании. Проведение серологических исследований позволяет оценить иммунный статус организма. Так, расхождение между показателями ПЦР, свидетельствующими о высокой репродуктивнойактивности вируса, и данными серологических исследований, показывающими низкий титр специфических антител, свидетельствует о недостаточности специфического гуморального иммунного ответа и является показанием к назначению заместительной терапии (препаратов специфических иммуноглобулинов) или средств, повышающих антителогенез (полиоксидоний, спленин и др.).

Иммунологические исследования являются обязательными при манифестных формах инфекции, так как вирус способен оказывать иммуносупрессивное действие на зараженный организм. Результаты таких исследований позволяют выявить иммунный дефект и назначить рациональную терапию. Метод применяется для выбора средств иммунотерапии и оценки их эффективности при лечении герпетических стоматитов.

Таким образом, диагностическими критериями герпетической инфекции полости рта являются:

-выявление вирусных агентов в крови, слюне, соскобах и мазках-отпечатках с элементов поражения достоверными методами: ПЦР, методом иммунофлюорисценции;

- в спорных случаях для экспресс-диагностики необходимо проводить цитологическое исследование с целью выявления клеток Тцанка;

- для диагностики первичной герпетической инфекции важным является выявление вирус-специфических иммуноглобулинов M и G.

При постановке диагноза обязательно учитывают наличие клинических признаков герпетической инфекции (типичных элементов поражения).

Для назначения рациональной противовирусной и иммунотерапии рекомендуется проведение следующих исследований:

- определение противогерпетических антител классаM, G и А для оценки напряженности специфического гуморального иммунитета;

- иммунологическое исследование проводят при тяжелом или атипичном течении и частых рецидивах герпетической инфекции, при низкой чувствительности к лечению ацикловиром и его аналогами.

 Похожие статьи

Осмотр слизистой полости рта

Начало осмотра. Визуальное исследование.

Красный плоский лишай

Красный плоский лишай это. Распространенность красного плоского лишая. Этиология. Классификация красного плоского лишая. Микроскопические проявления КПЛ. Дифференциальная диагностика. Лечение.

Хронический рецидивирующий афтозный стоматит (ХРАС)

Этиология. Патогенез. Гистология. Классификация ХРАС. Дифференциальная диагностика ХРАС. Лечение ХРАС.

Вверх